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凝胶层析蛋白纯化系统缓冲液的更换
点击次数:570 发布时间:2019-05-21

凝胶层析蛋白纯化系统缓冲液的更换

凝胶层析蛋白纯化系统及动力学研究,包括蛋白酶亲和配基CHOM的制备,蛋白酶的亲和层析分离纯化,凝胶电泳鉴定及分子量测定,蛋白酶的动力学研究等。分离纯化蛋白质是研究蛋白质结构、化学组成和生物功能的基础。根据蛋白质的不同性质,分离纯化的方法也是不同的。

凝胶层析蛋白纯化系统缓冲液的更换

虽然更换缓冲液不能提高蛋白纯度,但它却在蛋白纯化方案中起着极其重要的作用。不同的蛋白纯化方法需要不同pH及不同离子强度的缓冲液。

假如你用硫酸铵将蛋白沉淀出来,毫无疑问蛋白是处在高盐环境中,需要想办法脱盐,可用的方法有利用半透膜透析,通过勤换透析液体去除盐分,此法尚可,但需几个小时,通常要过夜,也难以用予大规模纯化中。

新型的设备将透析膜夹在两个板中间,板的一侧加缓冲液,另一侧加需脱盐的蛋白溶液,并在蛋白溶液一侧通过泵加压,可以使两侧溶液在数小时内达到平衡,若增加对蛋白溶液的压力,还可迫使水分和盐更多通过透析膜进入透析液达到对蛋白浓缩的目的。

也有出售的脱盐柱,柱内的填料是小孔径的颗粒,蛋白分子不能进入孔内,先于高浓度盐离子从柱中流出,从而使二者分离。

蛋白纯化的每一步都会造成目的蛋白的丢失,缓冲液平衡的步骤尤甚。蛋白会结合在任何它能接触的表面上,剪切力、起泡沫和离子强度的快速变化很容易让蛋白失活。

 

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